• 规格：20μl质粒
• 质粒图谱1： png/1-1F924202030341.png

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LOCUS       Exported               15888 bp ds-DNA     circular SYN 24-SEP-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

ACCESSION   .

VERSION     .

KEYWORDS    .

SOURCE      synthetic DNA construct

  ORGANISM  synthetic DNA construct

REFERENCE   1  (bases 1 to 15888)

  AUTHORS   .

  TITLE     Direct Submission

  JOURNAL   Exported Sep 24, 2017 from MiaoLingPlasmid

            http://www.fenghbio.cn

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..15888

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     terminator      71..323

                     /label=NOS terminator

                     /note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"

     misc_feature    551..575

                     /label=RB T-DNA repeat

                     /note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"

     CDS             1876..2505

                     /codon_start=1

                     /product="stability protein from the Pseudomonas plasmid 

                     pVS1 (Heeb et al., 2000)"

                     /label=pVS1 StaA

                     /translation="MKVIAVLNQKGGSGKTTIATHLARALQLAGADVLLVDSDPQGSAR

                     DWAAVREDQPLTVVGIDRPTIDRDVKAIGRRDFVVIDGAPQAADLAVSAIKAADFVLIP

                     VQPSPYDIWATADLVELVKQRIEVTDGRLQAAFVVSRAIKGTRIGGEVAEALAGYELPI

                     LESRITQRVSYPGTAAAGTTVLESEPEGDAAREVQALAAEIKSKLI"

     CDS             2934..4007

                     /codon_start=1

                     /product="replication protein from the Pseudomonas plasmid 

                     pVS1 (Heeb et al., 2000)"

                     /label=pVS1 RepA

                     /translation="MSGRKPSGPVQIGAALGDDLVEKLKAAQAAQRQRIEAEARPGESW

                     QAAADRIRKESRQPPAAGAPSIRKPPKGDEQPDFFVPMLYDVGTRDSRSIMDVAVFRLS

                     KRDRRAGEVIRYELPDGHVEVSAGPAGMASVWDYDLVLMAVSHLTESMNRYREGKGDKP

                     GRVFRPHVADVLKFCRRADGGKQKDDLVETCIRLNTTHVAMQRTKKAKNGRLVTVSEGE

                     ALISRYKIVKSETGRPEYIEIELADWMYREITEGKNPDVLTVHPDYFLIDPGIGRFLYR

                     LARRAAGKAEARWLFKTIYERSGSAGEFKKFCFTVRKLIGSNDLPEYDLKEEAGQAGPI

                     LVMRYRNLIEGEASAGS"

     rep_origin      4073..4267

                     /label=pVS1 oriV

                     /note="origin of replication for the Pseudomonas plasmid 

                     pVS1 (Heeb et al., 2000)"

     misc_feature    4611..4751

                     /label=bom

                     /note="basis of mobility region from pBR322"

     rep_origin      complement(4937..5525)

                     /direction=LEFT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(5612..6406)

                     /codon_start=1

                     /gene="aphA-3"

                     /product="aminoglycoside phosphotransferase"

                     /label=KanR

                     /note="confers resistance to kanamycin"

                     /translation="MAKMRISPELKKLIEKYRCVKDTEGMSPAKVYKLVGENENLYLKM

                     TDSRYKGTTYDVEREKDMMLWLEGKLPVPKVLHFERHDGWSNLLMSEADGVLCSEEYED

                     EQSPEKIIELYAECIRLFHSIDISDCPYTNSLDSRLAELDYLLNNDLADVDCENWEEDT

                     PFKDPRELYDFLKTEKPEEELVFSHGDLGDSNIFVKDGKVSGFIDLGRSGRADKWYDIA

                     FCVRSIREDIGEEQYVELFFDLLGIKPDWEKIKYYILLDELF"

     misc_feature    6831..6855

                     /label=LB T-DNA repeat

                     /note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA"

     polyA_signal    6933..7107

                     /label=CaMV poly(A) signal

                     /note="cauliflower mosaic virus polyadenylation signal"

     CDS             complement(7148..8173)

                     /codon_start=1

                     /gene="aph(4)-Ia"

                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"

                     /label=HygR

                     /note="confers resistance to hygromycin"

                     /translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG

                     YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRSQGVTLQDLP

                     ETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ

                     TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF

                     GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG

                     NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAK

                     K"

     promoter        complement(8240..8916)

                     /label=CaMV 35S promoter (enhanced)

                     /note="cauliflower mosaic virus 35S promoter with a 

                     duplicated enhancer region"

     promoter        9239..9619

                     /label=OsU3 promoter

                     /note="Oryza sativa (rice) snRNA U3 promoter"

     misc_RNA        9636..9711

                     /label=gRNA scaffold

                     /note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes 

                     CRISPR/Cas9 system"

     promoter        9792..11501

                     /gene="RUBQ2"

                     /label=Ubi promoter

                     /note="promoter for the rice (Oryza sativa) polyubiquitin 

                     gene RUBQ2"

     CDS             11581..11646

                     /codon_start=1

                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an

                     enterokinase cleavage site"

                     /label=3xFLAG

                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"

     CDS             11653..11673

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     CDS             11698..15798

                     /codon_start=1

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"

                     /label=Cas9

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /translation="DKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKN

                     LIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESF

                     LVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKF

                     RGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLE

                     NLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQI

                     GDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQ

                     QLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLR

                     KQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGN

                     SRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYF

                     TVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDS

                     VEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERL

                     KTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQ

                     LIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRH

                     KPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYL

                     YYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPS

                     EEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHV

                     AQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLN

                     AVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTE

                     ITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKE

                     SILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGIT

                     IMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNEL

                     ALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADA

                     NLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLD

                     ATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             15799..15846

                     /codon_start=1

                     /product="bipartite nuclear localization signal from 

                     nucleoplasmin"