• 规格：20μl质粒
• 质粒图谱1： png/1-1F9291JFN46.png

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LOCUS       Exported                9227 bp ds-DNA     circular SYN 29-SEP-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

ACCESSION   .

VERSION     .

KEYWORDS    .

SOURCE      synthetic DNA construct

  ORGANISM  synthetic DNA construct

REFERENCE   1  (bases 1 to 9227)

  AUTHORS   .

  TITLE     Direct Submission

            http://www.fenghbio.cn

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..9227

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     enhancer        50..429

                     /label=CMV enhancer

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

     promoter        430..633

                     /label=CMV promoter

                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 

                     promoter"

     regulatory      728..737

                     /regulatory_class="other"

                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 

                     of translation (Kozak, 1987)"

     CDS             737..778

                     /codon_start=1

                     /product="epitope tag from simian virus 5"

                     /label=V5 tag

                     /translation="GKPIPNPLLGLDST"

     CDS             779..826

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="APKKKRKVGIHGVPAA"

     CDS             827..4927

                     /codon_start=1

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"

                     /label=Cas9

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /translation="DKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKN

                     LIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESF

                     LVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKF

                     RGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLE

                     NLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQI

                     GDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQ

                     QLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLR

                     KQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGN

                     SRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYF

                     TVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDS

                     VEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERL

                     KTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQ

                     LIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRH

                     KPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYL

                     YYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPS

                     EEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHV

                     AQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLN

                     AVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTE

                     ITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKE

                     SILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGIT

                     IMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNEL

                     ALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADA

                     NLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLD

                     ATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     RBS             4840..4848

                     /label=Shine-Dalgarno sequence

                     /note="full consensus sequence for ribosome-binding sites 

                     upstream of start codons in E. coli; complementary to a 

                     region in the 3' end of the 16S rRNA (Chen et al., 1994)"

     CDS             4928..4960

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="SRADPKKKRKV"

     CDS             4982..5035

                     /codon_start=1

                     /product="2A peptide from Thosea asigna virus capsid 

                     protein"

                     /label=T2A

                     /note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond 

                     between the Gly and Pro residues, yielding separate 

                     polypeptides."

                     /translation="EGRGSLLTCGDVEENPGP"

     CDS             5036..5713

                     /codon_start=1

                     /label=OFP

                     /translation="MNLSKNVSVSVYMKGNVNNHEFEYDGEGGGDPYTGKYSMKMTLRG

                     QNSLPFSYDIITTAFQYGFRVFTKYPEGIVDYFKDSLPDAFQWNRRIVFEDGGVLNMSS

                     DITYKDNVLHGDVKAEGVNFPPNGPVMKNEIVMEEPTEETFTPKNGVLVGFCPKAYLLK

                     DGSYYYGNMTTFYRSKKSGQAPPGYHFVKHRLVKTNVGHGFKTVEQTEYATAHVSDLPK

                     FEA"

     polyA_signal    5785..5833

                     /label=HSV TK poly(A) signal

                     /note="herpes simplex virus thymidine kinase 

                     polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"

     rep_origin      6035..6463

                     /direction=RIGHT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        6483..6723

                     /label=U6 promoter

                     /note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"

     misc_feature    6728..6732

                     /label=overhang

     misc_feature    6733..6759

                     /label=crRNA

     misc_RNA        6760..6835

                     /label=gRNA scaffold

                     /note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes 

                     CRISPR/Cas9 system"

     misc_feature    6760..6764

                     /label=overhang

     misc_feature    6836..6841

                     /label=PolIII transcription terminator

     rep_origin      complement(7287..7875)

                     /direction=LEFT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(8046..8906)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     promoter        complement(8907..9011)

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

ORIGIN

        1 gttaggcgtt ttgcgctgct tcgcgatgta cgggccagat atacgcgttg acattgatta

       61 ttgactagtt attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc atatatggag

      121 ttccgcgtta cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa cgacccccgc

      181 ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac tttccattga

      241 cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca agtgtatcat

      301 atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg gcattatgcc

      361 cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt agtcatcgct

      421 attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg gtttgactca

      481 cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg gcaccaaaat