• 规格：20μl质粒
• • 质粒宿主：  哺乳细胞
  • 质粒用途：  基因编辑
  • 片段类型：  CRISPR
  • 片段物种：  
  • 原核抗性：  Amp
  • 筛选标记：  Puro，Zeo
  • 荧光标记：  
  • 启动子:  
  • 复制子:  
  • 拷贝数:  
  • 感受态:  Stbl3
  • 温度:  37度
  • 背景载体:  
  • 正向引物:  
  • 反向引物:  
  • 诱导方式:  
• 质粒简介：              pLV-dCas9-p300-P2A-PuroR哺乳CAS9表达质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1G2050UK51O.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported               14538 bp ds-DNA     circular SYN 04-DEC-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..14538

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     LTR             533..766

                     /label=3' LTR (Delta-U3)

                     /note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from

                     HIV-1"

     polyA_signal    798..1022

                     /label=bGH poly(A) signal

                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"

     rep_origin      1068..1496

                     /direction=RIGHT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        1510..1839

                     /label=SV40 promoter

                     /note="SV40 enhancer and early promoter"

     rep_origin      1690..1825

                     /label=SV40 ori

                     /note="SV40 origin of replication"

     promoter        1887..1934

                     /label=EM7 promoter

                     /note="synthetic bacterial promoter "

     CDS             1953..2327

                     /codon_start=1

                     /gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"

                     /product="antibiotic-binding protein"

                     /label=Zeo

                     /note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and 

                     Zeocin(TM)"

                     /translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD

                     VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR

                     EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"

     polyA_signal    2457..2578

                     /label=SV40 poly(A) signal

                     /note="SV40 polyadenylation signal"

     rep_origin      complement(3029..3617)

                     /direction=LEFT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(3788..4648)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     promoter        complement(4649..4753)

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

     enhancer        5019..5398

                     /label=CMV enhancer

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

     promoter        5400..5598

                     /label=CMV promoter

                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 

                     promoter"

     LTR             5616..5796

                     /label=5' LTR (truncated)

                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"

     misc_feature    5843..5968

                     /label=HIV-1 Psi

                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 

                     type 1"

     misc_feature    6461..6694

                     /label=RRE

                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 

                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 

                     cytoplasm."

     misc_feature    7221..7338

                     /label=cPPT/CTS

                     /note="central polypurine tract and central termination 

                     sequence of HIV-1"

     promoter        7458..7669

                     /label=EF-1-alpha core promoter

                     /note="core promoter for human elongation factor 

                     EF-1-alpha"

     regulatory      7688..7697

                     /regulatory_class="other"

                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 

                     of translation (Kozak, 1987)"

     CDS             7694..11797

                     /codon_start=1

                     /product="catalytically dead mutant of the Cas9 

                     endonuclease from the Streptococcus pyogenes Type II 

                     CRISPR/Cas system"

                     /label=dCas9

                     /note="RNA-guided DNA-binding protein that lacks 

                     endonuclease activity due to the D10A mutation in the RuvC 

                     catalytic domain and the H840A mutation in the HNH 

                     catalytic domain"

                     /translation="MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK

                     NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES

                     FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK

                     FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL

                     ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ

                     IGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR

                     QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL

                     RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG

                     NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY

                     FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD

                     SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER

                     LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM

                     QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR

                     HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY

                     LYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP

                     SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH

                     VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL

                     NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT

                     EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK

                     ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI

                     TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE

                     LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD

                     ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL

                     DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             11798..11845

                     /codon_start=1

                     /product="bipartite nuclear localization signal from 

                     nucleoplasmin"

                     /label=nucleoplasmin NLS

                     /translation="KRPAATKKAGQAKKKK"

     CDS             11852..13702

                     /codon_start=1

                     /gene="EP300"

                     /product="catalytic histone acetyltransferase core of the 

                     human E1A-associated protein p300 (Delvecchio et al., 

                     2013)"

                     /label=p300 core

                     /translation="IFKPEELRQALMPTLEALYRQDPESLPFRQPVDPQLLGIPDYFDI

                     VKSPMDLSTIKRKLDTGQYQEPWQYVDDIWLMFNNAWLYNRKTSRVYKYCSKLSEVFEQ

                     EIDPVMQSLGYCCGRKLEFSPQTLCCYGKQLCTIPRDATYYSYQNRYHFCEKCFNEIQG

                     ESVSLGDDPSQPQTTINKEQFSKRKNDTLDPELFVECTECGRKMHQICVLHHEIIWPAG

                     FVCDGCLKKSARTRKENKFSAKRLPSTRLGTFLENRVNDFLRRQNHPESGEVTVRVVHA

                     SDKTVEVKPGMKARFVDSGEMAESFPYRTKALFAFEEIDGVDLCFFGMHVQEYGSDCPP