• 商品货号：FH1645

• 规格：10μl质粒
• 原核抗性：壮观霉素Spe
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 质粒简介：              pX330S-3是一个哺乳细胞CAS9和gRNA表达质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1G205092U3K2.png

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LOCUS       Exported                8698 bp ds-DNA     circular SYN 04-DEC-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..8698

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     enhancer        8..293

                     /label=CMV enhancer

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer; 

                     contains an 18-bp deletion relative to the standard CMV 

                     enhancer"

     promoter        295..572

                     /label=chicken beta-actin promoter

     intron          573..801

                     /label=hybrid intron

                     /note="hybrid between chicken beta-actin (CBA) and minute 

                     virus of mice (MMV) introns (Gray et al., 2011)"

     regulatory      813..822

                     /regulatory_class="other"

                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 

                     of translation (Kozak, 1987)"

     CDS             822..887

                     /codon_start=1

                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an

                     enterokinase cleavage site"

                     /label=3xFLAG

                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"

     CDS             894..914

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     CDS             939..5039

                     /codon_start=1

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"

                     /label=Cas9

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /translation="DKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKN

                     LIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESF

                     LVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKF

                     RGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLE

                     NLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQI

                     GDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQ

                     QLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLR

                     KQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGN

                     SRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYF

                     TVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDS

                     VEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERL

                     KTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQ

                     LIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRH

                     KPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYL

                     YYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPS

                     EEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHV

                     AQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLN

                     AVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTE

                     ITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKE

                     SILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGIT

                     IMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNEL

                     ALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADA

                     NLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLD

                     ATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             5040..5087

                     /codon_start=1

                     /product="bipartite nuclear localization signal from 

                     nucleoplasmin"

                     /label=nucleoplasmin NLS

                     /translation="KRPAATKKAGQAKKKK"

     polyA_signal    5121..5328

                     /label=bGH poly(A) signal

                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"

     repeat_region   5337..5477

                     /label=AAV2 ITR

                     /note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus 

                     serotype 2"

     rep_origin      5552..6007

                     /direction=RIGHT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     CDS             6628..7419

                     /codon_start=1

                     /gene="aadA"

                     /product="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy, 

                     1985)"

                     /label=Spe

                     /note="confers resistance to spectinomycin and 

                     streptomycin"

                     /translation="MREAVIAEVSTQLSEVVGVIERHLEPTLLAVHLYGSAVDGGLKPH

                     SDIDLLVTVTVRLDETTRRALINDLLETSASPGESEILRAVEVTIVVHDDIIPWRYPAK

                     RELQFGEWQRNDILAGIFEPATIDIDLAILLTKAREHSVALVGPAAEELFDPVPEQDLF

                     EALNETLTLWNSPPDWAGDERNVVLTLSRIWYSAVTGKIAPKDVAADWAMERLPAQYQP

                     VILEARQAYLGQEEDRLASRADQLEEFVHYVKGEITKVVGK"

     rep_origin      7602..8190

                     /direction=RIGHT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     promoter        8267..8507

                     /label=U6 promoter

                     /note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"

     misc_RNA        8534..8609

                     /label=gRNA scaffold

                     /note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes 

                     CRISPR/Cas9 system"

ORIGIN

        1 tgagacccgt tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc

       61 gcccattgac gtcaatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt

      121 atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc

      181 ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcattg tgcccagtac atgaccttat

      241 gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtcgagg

      301 tgagccccac gttctgcttc actctcccca tctccccccc ctccccaccc ccaattttgt

      361 atttatttat tttttaatta ttttgtgcag cgatgggggc gggggggggg ggggggcgcg

      421 cgccaggcgg ggcggggcgg ggcgaggggc ggggcggggc gaggcggaga ggtgcggcgg

      481 cagccaatca gagcggcgcg ctccgaaagt ttccttttat ggcgaggcgg cggcggcggc

      541 ggccctataa aaagcgaagc gcgcggcggg cgggagtcgc tgcgacgctg ccttcgcccc

      601 gtgccccgct ccgccgccgc ctcgcgccgc ccgccccggc tctgactgac cgcgttactc

      661 ccacaggtga gcgggcggga cggcccttct cctccgggct gtaattagct gagcaagagg

      721 taagggttta agggatggtt ggttggtggg gtattaatgt ttaattacct ggagcacctg

      781 cctgaaatca ctttttttca ggttggaccg gtgccaccat ggactataag gaccacgacg

      841 gagactacaa ggatcatgat attgattaca aagacgatga cgataagatg gccccaaaga

      901 agaagcggaa ggtcggtatc cacggagtcc cagcagccga caagaagtac agcatcggcc

      961 tggacatcgg caccaactct gtgggctggg ccgtgatcac cgacgagtac aaggtgccca

     1021 gcaagaaatt caaggtgctg ggcaacaccg accggcacag catcaagaag aacctgatcg

     1081 gagccctgct gttcgacagc ggcgaaacag ccgaggccac ccggctgaag agaaccgcca

     1141 gaagaagata caccagacgg aagaaccgga tctgctatct gcaagagatc ttcagcaacg

     1201 agatggccaa ggtggacgac agcttcttcc acagactgga agagtccttc ctggtggaag

     1261 aggataagaa gcacgagcgg caccccatct tcggcaacat cgtggacgag gtggcctacc

     1321 acgagaagta ccccaccatc taccacctga gaaagaaact ggtggacagc accgacaagg

     1381 ccgacctgcg gctgatctat ctggccctgg cccacatgat caagttccgg ggccacttcc

     1441 tgatcgaggg cgacctgaac cccgacaaca gcgacgtgga caagctgttc atccagctgg

     1501 tgcagaccta caaccagctg ttcgaggaaa accccatcaa cgccagcggc gtggacgcca

     1561 aggccatcct gtctgccaga ctgagcaaga gcagacggct ggaaaatctg atcgcccagc

     1621 tgcccggcga gaagaagaat ggcctgttcg gaaacctgat tgccctgagc ctgggcctga

     1681 cccccaactt caagagcaac ttcgacctgg ccgaggatgc caaactgcag ctgagcaagg

     1741 acacctacga cgacgacctg gacaacctgc tggcccagat cggcgaccag tacgccgacc

     1801 tgtttctggc cgccaagaac ctgtccgacg ccatcctgct gagcgacatc ctgagagtga

     1861 acaccgagat caccaaggcc cccctgagcg cctctatgat caagagatac gacgagcacc

     1921 accaggacct gaccctgctg aaagctctcg tgcggcagca gctgcctgag aagtacaaag

     1981 agattttctt cgaccagagc aagaacggct acgccggcta cattgacggc ggagccagcc

     2041 aggaagagtt ctacaagttc atcaagccca tcctggaaaa gatggacggc accgaggaac

     2101 tgctcgtgaa gctgaacaga gaggacctgc tgcggaagca gcggaccttc gacaacggca

     2161 gcatccccca ccagatccac ctgggagagc tgcacgccat tctgcggcgg caggaagatt

     2221 tttacccatt cctgaaggac aaccgggaaa agatcgagaa gatcctgacc ttccgcatcc

     2281 cctactacgt gggccctctg gccaggggaa acagcagatt cgcctggatg accagaaaga

     2341 gcgaggaaac catcaccccc tggaacttcg aggaagtggt ggacaagggc gcttccgccc

     2401 agagcttcat cgagcggatg accaacttcg ataagaacct gcccaacgag aaggtgctgc

     2461 ccaagcacag cctgctgtac gagtacttca ccgtgtataa cgagctgacc aaagtgaaat